实验动物镇静、止痛、麻醉和安乐死指南
日期:2024-01-20 编辑:manager001 来源:南昌大学动物中心 访问量:

1目的:规范实验动物镇静剂、麻醉剂和止痛剂的使用。以及实验动物安乐死方法,确保人道的处理动物。

2范围:根据AAALAC要求,参考Laboratory Animal Anaesthesia 和AVMA Guidelines on Euthanasia推荐的动物安乐死方法制定本使用指南,为各院系PI撰写研究计划提供正确合理的镇静、麻醉和安乐死选择药物和方法。

对于给药方式说明:IP----腹腔注射 SC----皮下注射 IM----肌肉注射   IV----静脉注射  PO----口服

3设备与材料:CO2气瓶;配带盖和各种动物品种大小的麻醉诱导箱;麻醉机;注射剂或吸入剂;适当规格的注射器和针;个人防护装备至少包括防护服、手套、帽子和口罩等

4.步骤:

4.1 麻醉规程

麻醉时应认真检查所用的麻醉/止痛剂的有效使用日期,不可以使用过期的药物。

从开始麻醉到动物清醒必须对动物进行实时监护。麻醉的动物会反应迟钝、无方向感,所以麻醉时应将动物放置笼中或采取适当的措施防止动物造成损伤。动物完全麻醉(完全失去意识)方可开始手术。

麻醉期间应注意对动物采取适当的保温措施,如电热毯或红外线加热灯,防止动物体温降低。

4.2对麻醉程度的检测

     如果动物有翻身反应或对疼痛和刺激发生反应,如表现蠕动、移动、收回肢体,则手术必须延迟进行。

     深度疼痛测试,用手指挤压动物的后肢脚趾,如果动物有反应如缩回后肢,则动物意识未完全消失;如果动物对测试无反应,则为无意识或意识消失,麻醉达到手术要,可以开始手术。

     外科手术开始时,动物应充分松弛、对疼痛刺激无反应、呼吸和心率正常。

4.3 设施

    在动物房或手术室实施麻醉。但麻醉时应尽量不要在其它动物听到、看见和闻到的区域进行。

4.4局部麻醉

    局麻是在小的非创伤性手术时,减轻动物痛苦而采取的措施。局麻的选择将取决于手术所需时间的长短、场所和动物品种。常用的局麻药有盐酸利多卡因和盐酸普鲁卡因。

4.5剂量计算

根据动物的体重,计算麻醉药合适的给药剂量。

例如,用氯胺酮+安定麻醉300g的大鼠

氯胺酮的剂量是75mg/kg,安定是5mg/kg

因此,0.300kg×75mg/kg=22.5mg氯胺酮

0.300kg×5mg/kg=1.5mg安定

4.6 根据动物品种选择麻醉药物、剂量和给药途径

吸入麻醉剂(如异丙烷)所有品种的动物均适用。钢瓶中压缩CO2气体与氧气(50:50)混合至100%的CO2可以用于啮齿类动物短期吸入麻醉剂。

4.7.1 CO2麻醉

     CO2诱导短暂的失去意识并适用于某些实验过程,如眼眶后静脉丛采血和一些注射。每次只麻醉一只动物。

     使用一个与氧气未混合的CO2相连的容器。打开气瓶的主要阀门,通过微调从而调整气体压力。把动物放进气体流动的容器并关上容器盖子。离开动物1-3/2分钟直到动物呼吸缓慢和无意识,从容器中取出动物开始实验。动物将维持20-30秒无意识状态。如果需要再麻醉20秒,追加一次麻醉剂量,不可以连续超过2次追加CO2麻醉。动物在容器中不可以放置超过5/2分钟。

     动物将完全恢复,动物一恢复意识就放回原笼中。

     在动物放进容器前,通过往眼里滴一滴盐酸丙对卡因更有宜于眼眶后静脉丛采血。局麻可以使动物减少对操作的敏感性并延长动物失去意识的时间,动物大约10秒钟就失去意识。先于采血前眼睛用薄纸擦拭以除去残余的盐酸丙对卡因。

4.7.2 常用的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.1小鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.1.1 小鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.04 mg/kg SC or IP 抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定 5 mg/kg IP 轻微镇静作用;不能止痛
氟胺酮 0.1-0.3 ml/kg IP 轻度镇静,中度止痛;
氯胺酮 100-200 mg/kg IM 深度镇静,轻微止痛;缺乏肌肉松弛作用

4.7.2.1.2 小鼠麻醉药物的选择

注射用麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间(min) 恢复时间(min)
氯胺酮﹠安定 100mg/kg﹠5mg/kg IP 保定/麻醉 20-30 60-120
丙泊酚 26mg/kg IV 外科麻醉 5-10 10-15
氟胺铜﹠安定 0.4ml/kg&5mg/kg IP or IP 外科麻醉 20-40 120-240
丙泊酚 26mg/kg(然后2-2.5mg/kg/min) IV 外科麻醉 1-12hours 10-15
异氟烷 0.41ml/min
at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入 外科麻醉 -- --
三溴乙醇(阿弗丁) 125-240 mg/kg(使用浓度0.25%) IP 外科麻醉 15-45 60-120

注: 100%阿佛丁(三溴乙醇+叔戊醇=1:1配成);使用时用生理盐水进行稀释使用。

     异氟烷使用需要面罩。

4.7.2.1.3小鼠止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
阿司匹林 120 mg/kg PO 轻微止痛 -
丁丙诺啡 0.05-0.1mg/kg SC 中等止痛 8-12 Hours
卡洛芬 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
美洛昔康 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours

4.7.2.1.4 小鼠安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有小鼠 可接受方法
CO2 ---- 成年小鼠 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼 ---- 所有小鼠 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术

4.7.2.2大鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.2.1 大鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.05 mg/kg SC or IP 抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
氟胺酮 0.2-0.5 ml/kg IM 轻度/中度镇静,中度止痛;
安定 2.5-5 mg/kg IP or IM 轻微镇静作用;不能止痛
氯胺酮 50-100 mg/kg IP or IM 深度镇静,轻微止痛;缺乏肌肉松弛作用

4.7.2.2.2 大鼠麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
氯胺酮﹠安定 75mg/kg﹠ 5mg/kg IP 轻度麻醉 20-30 120
丙泊酚 10 mg/kg IV 外科麻醉 5 10
氟胺铜﹠ 安定 0.6ml/kg﹠ 2.5mg/kg IP or IP 外科麻醉 20-40 120-240
丙泊酚 10-12mg/kg(然后0.5-1.0mg/kg/min) IV 外科麻醉 1-12 hours 10-15
异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%) 吸入 外科麻醉 -- --
三溴乙醇(阿弗丁) 300 mg/kg IP 外科麻醉 10-20 45-90

注: 100%阿佛丁(三溴乙醇+叔戊醇=1:1配成);使用时用生理盐水进行稀释使用。

     异氟烷使用需要面罩。

4.7.2.2.3大鼠止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
阿司匹林 100 mg/kg PO 中等止痛 -
卡洛芬 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
美洛昔康 5 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
丁丙诺啡 0.01-0.05mg/kg SC or IV 中等止痛 8-12 Hours
丁丙诺啡 0.1-0.25mg/kg PO 中等止痛 8-12 Hours

4.7.2.2.4 大鼠安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有大鼠 可接受方法
CO2 ---- 成年大鼠 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼 ---- 体重<200g 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术颈椎脱臼前需要进行麻醉处理

4.7.2.3豚鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.3.1 豚鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.05 mg/kg SC 抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定 5 mg/kg IP or IM 深度镇静作用
氟胺酮 1.0 ml/kg IP or IM 中度镇静,中度止痛;
氯胺酮 100 mg/kg IM 深度镇静,轻微止痛;缺乏肌肉松弛作用

4.7.2.3.2 豚鼠麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
氟胺铜﹠ 安定 1.0ml/kg﹠ 2.5mg/kg IP or IM﹠IP 外科麻醉 45-60 120-180
氟胺铜﹠ 安定 1.0ml/kg/h﹠ 2mg/kg(每4小时) IP ﹠IP 外科麻醉 1-12 hours 120-180
氯胺酮﹠ 安定 100 mg/kg﹠ 5mg/kg IM 保定/麻醉 30-45 90-120
异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%) 吸入 外科麻醉 -- --

注: 异氟烷使用需要面罩。

4.7.2.3.3豚鼠止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
阿司匹林 87 mg/kg PO 轻微止痛 -
卡洛芬 4 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
丁丙诺啡 0.01-0.05 mg/kg SC or IP 中等止痛 大约8-12 Hours

4.7.2.3.4 豚鼠安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有豚鼠 可接受方法
CO2 ---- 成年豚鼠 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间

4.7.2.4兔子的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.4.1 兔子镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.05 mg/kg IM 抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定 0.5-2 mg/kg IP or IM or IV 由轻到重度镇静;不能止痛
氟胺酮 0.2-0.5 ml/kg IM 轻到中度镇静,轻到深度止痛;
氯胺酮 25-50 mg/kg IM 中度缓解镇静,中度止痛;缺乏肌肉松弛作用

4.7.2.4.2 兔子麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
美索比妥 10-15mg/kg(使用浓度1%) IV 外科麻醉 4-5 5-10
丙泊酚 10 mg/kg IV 轻度麻醉 5-10 10-15
氟胺铜﹠ 安定 0.3ml/kg﹠ 1-2 mg/kg IM ﹠ IV 外科麻醉 20-40 60-120
氟胺铜﹠ 安定 0.1-0.3ml/kg/h﹠ 1mg/kg(每4 小时) IV ﹠ IV 外科麻醉 1-12 hours 60-120
异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%) 吸入 外科麻醉 -- --
氯胺酮﹠ 安定 25 mg/kg﹠ 5mg/kg IM ﹠IM 外科麻醉 20-30 60-90

注: 异氟烷使用需要“Bain's回路”或者“Ayre's三通管”。

4.7.2.4.3兔子止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
阿司匹林 100 mg/kg PO 轻微止痛 不清晰
卡洛芬 4 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
丁丙诺啡 0.05-0.1mg/kg SC or IP 中等止痛 8-12 Hours

4.7.2.4.4 兔子安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有兔子 可接受方法
CO2 ---- 成年兔子 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼 ---- 体重<1 kg 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(颈椎脱臼前需要进行麻醉处理)

4.7.2.5犬的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.5.1 犬镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.05 mg/kg SC or IM 抗胆碱能作用;
美托咪啶 10-100ug/kg SC or IM or IV 轻到深度镇静;轻到中度止痛
乙酰丙嗪 0.1-0.25 mg/kg IM 轻到中度镇静作用
氟胺酮 0.1-0.2 ml/kg IM 中度到深度镇静,中度止痛;

4.7.2.5.2 犬麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间min
丙泊酚 5-7.5 mg/kg IV 外科麻醉 5-10 15-30
丙泊酚 5-7.5mg/kg(然后0.2-0.4mg/kg/min) IV 外科麻醉 20-30 15-30
丙泊酚 5-7.5mg/kg(然后0.2-0.4mg/kg/min) IV 外科麻醉 1-12 hours 10-15
异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%) 吸入 外科麻醉 -- --
氯胺酮﹠美托咪啶 2.5-7.5 mg/kg﹠ 40ug/kg IM or IM 轻到中度麻醉 30-45 60-120

注: 异氟烷使用需要“Bain's或者 MaGill回路”。

4.7.2.5.3犬止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
卡洛芬 4 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
美洛昔康 0.2 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
丁丙诺啡 0.005-0.02 mg/kg SC or IP 中等止痛 8-12 Hours

4.7.2.5.4 犬安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有犬 可接受方法
CO2 ---- 成年犬 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
氯化钾联合其他麻醉药 ---- 所有犬 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(心内注射氯化钾前先进行麻醉处理)

4.7.2.6小型猪的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.6.1 小型猪镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.05 mg/kg SC or IM 抗胆碱能作用;
安定 1-2 mg/kg IM 轻到中度镇静作用;
氯胺酮 10-15 mg/kg IM 镇静;保定

4.7.2.6.2 小型猪麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
氯胺酮 10-15 mg/kg IM 镇静;保定 20-30 60-120
丙泊酚 2.5-3.5 mg/kg IV 外科麻醉 5-10 15-30
丙泊酚 2.5-3.5mg/kg(然后0.1-0.2mg/kg/min) IV 外科麻醉 20-30 15-30
丙泊酚 2.5-3.5mg/kg(然后0.1-0.2mg/kg/min) IV 外科麻醉 1-12 hours 10-15
异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%) 吸入 外科麻醉 -- --
氯胺酮﹠ 安定 10-15 mg/kg﹠ 0.5-2mg/kg IM ﹠IM 保定/轻度麻醉 20-30 60-90

注: 异氟烷使用需要“Bain's或者 MaGill回路”或者“循环系统”。

4.7.2.6.3小型猪止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
卡洛芬 2-4 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
丁丙诺啡 0.01-0.05mg/kg SC or IP 中等止痛 8-12 Hours

4.7.2.6.4 小型猪安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有小型猪 可接受方法
CO2 ---- 成年小型猪 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
氯化钾联合其他麻醉药 ---- 所有小型猪 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(心内注射氯化钾前先进行麻醉处理)
打击头部 ---- 幼龄猪周龄 条件可接受;要求技术,充分保定,和适当的力量

4.7.2.7非人灵长类的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.7.1 非人灵长类镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
阿托品 0.05 mg/kg SC or IM 抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定 1 mg/kg IM 轻到中度镇静
氯胺酮 5-25 mg/kg IM 中度镇静;保定;轻微止痛;

4.7.2.7.2 非人灵长类麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
丙泊酚 7-8 mg/kg IV 外科麻醉 5-10 10-15
氯胺酮﹠ 美托咪啶 5 mg/kg﹠ 0.05mg/kg IM ﹠IM 外科麻醉 30-40 60-120
丙泊酚 7-8 mg/kg (然后0.3-0.6mg/kg/min) IV 外科麻醉 1-12 hours 10-15
异氟烷 0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%) 吸入 外科麻醉 -- --
氯胺酮﹠ 安定 15 mg/kg﹠ 1mg/kg IM ﹠IM 外科麻醉 30-40 60-90

注: 异氟烷使用需要“Bain's回路或者 Ayre's三通管(体重<10 kg)”

     或者“MaGill回路(体重>10 kg)”。

4.7.2.7.3非人灵长类止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
氟胺铜 0.3ml /kg IM 良好止痛 -
卡洛芬 3-4 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
美洛昔康 0.1-0.2 mg/kg SC 中等止痛 24 Hours
丁丙诺啡 0.005-0.01 mg/kg IM or IV 中等止痛 8-12 Hours
吗啡 1-2 mg/kg SC or IM 中等止痛 4 Hours

4.7.2.7.4 非人灵长类安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有非人灵长类 可接受方法
吸入麻醉CO2 ---- 成年非人灵长类 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间

4.7.2.8鸟的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.8.1 鸟镇静剂和诱导麻醉药物的选择

术前诱导麻醉药物 剂量 给药方式 效果
氯胺酮(>1 kg) 15-20 mg/kg IM 轻微止痛;保定
氯胺酮(<1 kg) 30-40 mg/kg IM 轻微止痛;保定

4.7.2.8.2 鸟麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
氯胺酮﹠ 安定 20-40 mg/kg﹠ 1-1.5mg/kg IM ﹠IM 中等外科麻醉 20-30 30-90

4.7.2.8.3鸟止痛药物的选择

止痛剂 剂量 给药方式 效果 效果持续时间
丁丙诺啡 0.01-0.05mg/kg IM 中等止痛 8-12 Hours

4.7.2.8.4 鸟安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
戊巴比妥钠 100-200 mg/kg 所有鸟 可接受方法
CO2 ---- 成年鸟 可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼 ---- 所有鸟 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(脱臼前进行麻醉处理)
胸部压迫 ---- 小到中型鸟类 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术

4.7.2.9鱼的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法

4.7.2.9.1 鱼镇镇静、麻醉、止痛和诱导麻醉药物的选择

注射用 麻醉剂 剂量 给药方式 麻醉深度(轻度/外科麻醉) 持续时间 min 恢复时间 min
MS222 25-300 mg/l 沉浸 外科麻醉    
盐酸苯佐卡因 25-100 mg/l 沉浸 外科麻醉 2 分钟诱导 撤消后5分钟恢复

注:1.苯佐卡因配置:首先200 mg苯佐卡因+5 ml 丙酮,进行溶解,再加入8 L 水配置成25ppm(25mg/l)的苯佐卡因。

   2.小到中型鱼(金鱼和鲑鱼),MS222 浓度为100 mg/l。

4.7.2.9.2鱼安乐死的药物和方法选择

药物或方法 剂量 试用动物 备注
MS222 ≧300 mg/l 所有鱼类 可接受方法
盐酸苯佐卡因 ≧100 mg/l 成年鱼类 可接受方法
脑脊髓刺毁法 ---- 所有鱼类 条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术

4.8 保存记录

需要所有麻醉程序的手写记录文件。记录应该包括但不仅局限于以下几点:

IACUC动物使用和管理方案编号

麻醉日期、时间和负责人签字

品系和个体或动物组别标记

使用的麻醉剂、止痛剂或镇静剂名称、剂量、给药途径和时间

如果需要在整个过程中监测生理参数(如心率、呼吸次数/节律、体温、粘膜色泽和足部的松弛度等)

4.9术后恢复

动物可与正处于恢复期的同一品系动物放在一个笼具中,也可单独放在一个饲养笼内,但不要与未麻醉的动物放在一起,防止恢复期动物受伤。动物恢复期必须保温。当动物恢复正常活动时,可以与其它动物放回同一笼或一个动物房间。随后几天必须定时对动物进行观察保证不出现并发症。